Sie können unsere Kinaseprodukte bereits ab einer Größe von 5 ug bis hin zu großen Mengen erwerben. Einige Kinasen sind nur in der Menge von 5 ug erhältlich.

50 ug ist die Mindestmenge für inaktive und inaktiv-mutierte Kinasen.

Bitte erkundigen Sie sich bei uns. Einige Kinasen befinden sich in der Entwicklung. Auf Anfrage können wir auch mutierte Formen bestimmter Proteinkinasen herstellen.

Alle in der Liste aufgeführten Proteinkinasen sind rekombinante menschliche (human) Proteine.

Die meisten unserer Kinasen werden mit einem Baculovirus-Expressionssystem hergestellt, einige wenige mit einem E.coli-Expressionssystem. Für einen Überblick über unsere Methoden folgen Sie bitte unserer Seite über Kinaseprodukte und klicken Sie auf den Produktnamen Ihres Interesses, um die vollständige "Produktbeschreibung" anzuzeigen.

Ja. Wenn eine Kinase nach der Expression eine geringe Aktivität oder eine Verzögerungsphase nach dem Start der Kinasereaktion zeigt, aktivieren wir sie durch ATP-Behandlung, Koexpression oder Inkubation mit der/den vorgeschalteten Kinase(n), Entfernung der GST-tag durch Protease oder eine andere Aktivierungsmethode, je nach Art der Kinase. Einzelheiten entnehmen Sie bitte unserer technischen Notiz "Carna Coffee Break No.1".

Ja. Wir verkaufen inaktive Kinasen und inaktive Kinasemutanten, die mit der MAP-Kinase-Kaskade zusammenhängen. Diese können als Substrate und in anderen Anwendungen verwendet werden. Bitte beachten Sie die Produktliste auf unserer Seite Kinaseprodukte.

Ja. Alle unsere Kinasen enthalten eine Spaltstelle zwischen der Kinasesequenz und dem Tag. Der GST-Tag kann mit Precission-Protease (Cytiva) und der His-Tag mit TEV-Protease gespalten werden. Unsere biotinylierten Kinasen enthalten den DYKDDDDK-Tag zwischen der Kinase und der biotinylierten Stelle, wobei die biotinylierte Stelle mit Enterokinase gespalten werden kann.

Alle von uns vertriebenen biotinylierten Kinasen enthalten ein einziges Biotin pro Molekül.

Wir bestimmen die Reinheit unserer Kinasen mit Hilfe von SDS-PAGE-Gelen; die Aktivität wird in einem Kinase-Assay durch Untersuchung der Phosphorylierung des Substrats bestimmt.

Da wir ein hochgradig reproduzierbares Herstellungsverfahren anwenden und die Aktivität jeder Charge überwachen, sind die Aktivitätsunterschiede zwischen den einzelnen Chargen bei den meisten unserer Kinaseprodukte gering. Wenn Sie einen möglichen Aktivitäts- oder Reinheitsunterschied zwischen den Chargen bestätigen möchten, kontaktieren Sie uns bitte.

Wir führen Massenspektrometrie für Peptid-Fingerprinting durch, um die korrekte Sequenz zu bestätigen.

Wenn Sie auf unserer Produktinformationsseite auf den Namen der spezifischen Kinase klicken, können Sie die Sequenzinformationen unter "AMINOSÄURE-SEQUENZ" oben auf der Seite einsehen.

Wir empfehlen unsere biotinylierten Kinasen für Bindungsstudien aufgrund ihrer hohen Reinheit und ihrer Markierung und dem geringem Molekulargewicht.

Für unsere Kinasen sind keine Sicherheitsdatenblätter erforderlich.

Alle Kinasen werden im hauseigenen Labor von Carna Biosciences in Japan hergestellt.

Alle unsere Kinasen werden auf Trockeneis versandt. Sobald Sie die Lieferung erhalten, bringen Sie die Kinase(n) bitte in einen -80℃ Gefrierschrank (oder kälter). Eine ordnungsgemäße Lagerung ist für die Haltbarkeit von entscheidender Bedeutung. Sobald Sie die Kinase auftauen, aliquotieren Sie den Rest, um Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.

Bitte verwenden Sie die Zusammensetzung unseres Puffers. Die Beschreibung finden Sie auf dem beiligenden Produktinformationsblatt.

Der Assay-Service wird von Carna Biosciences in Japan angeboten und durchgeführt, während Kinase Logistics als Distributor fungiert.

Bei ATP-kompetitiven Inhibitoren werden die Abhängigkeiten zwischen der halbmaximalen Hemmkonzentration (IC50) und den ATP-Konzentrationen durch die Cheng-Prusoff-Gleichung beschrieben (IC50 = Ki + Ki/Km×[ATP]). Indem die ATP-Konzentration durch ihren Km-Wert dargestellt wird, entspricht die IC50 dem 2fachen Ki-Wert. Somit werden die IC50-Werte zu einem direkten und vergleichbaren Maß für die Affinität zwischen dem Inhibitor und den untersuchten Kinasen.

Wir empfehlen Ihnen, zunächst die prozentuale Hemmung bei 1-10μM zu messen und dann Verbindungen mit starker Hemmwirkung auszuwählen. Für nachfolgende IC50-Bestimmungen können Sie sich auf die Ergebnisse der prozentualen Hemmung beziehen, um geeignete Testkonzentrationen festzulegen.

Die Informationen finden Sie im neuesten Buch über Kinase-Profiling. Detaillierte Bedingungen finden Sie in diesem Buch.

Das erforderliche Probenvolumen beträgt jeweils 500uL bei weniger als 100 Zielkinasen, 1000uL bei mehr als 100 Kinasen. Bitte bereiten Sie die Proben in 100% DMSO vor, 100x der höchsten von Ihnen gewählten Testkonzentration. Bitte klicken Sie hier für weitere Details.

Ja. In der Regel werden die Proben für 3 Monate nach Einreichung des Ergebnisberichts aufbewahrt. Wenn Sie die Aufbewahrungszeit verlängern möchten, kontaktieren Sie uns bitte.

In der Regel verwenden wir den Mobility Shift Assay (MSA) als erste Wahl, da er einfach zu bedienen und in hohem Maße reproduzierbar ist und sowohl phosphorylierte als auch nicht-phosphorylierte Substrate gleichzeitig nachweisen kann. Ein Substrat für den MSA sollte jedoch ein Peptid sein, das nur eine Phosphorylierungsstelle in der Sequenz aufweist und einen nahezu neutralen pI-Wert hat. Wenn ein solches Substrat nicht verfügbar ist, setzen wir eine andere Nachweismethode ein. Mit Ausnahmen ist ADP-Glo™ die Plattform der Wahl für Kinasen, deren Substrate Lipide sind, und IMAP wird gewählt, wenn das Peptidsubstrat mehr als zwei Phosphorylierungsstellen hat. Die meisten Targets werden im MSA-Format durchgeführt.

Die 1mM-ATP-Profiling-Assays sind nützlich für die Vorhersage der potenziellen intrazellulären Selektivität Ihres Inhibitors unter Bedingungen, die physiologischen ATP-Konzentrationen nahe kommen. Profiling bei 1mM ATP kann auch dabei helfen, mögliche nicht ATP-kompetitive Inhibitoren zu identifizieren, wenn sie mit IC50-Daten verglichen werden, die bei ATP Km generiert wurden.

Bitte wählen Sie auf der Startseite des Profiling Service eine Testplattform aus und lesen Sie den "Leitfaden für unsere Service-Kunden", um mehr über den Service zu erfahren. Oder zögern Sie nicht, uns zu kontaktieren und wir helfen Ihnen gerne weiter!

In der Regel erhalten Sie 2-3 Wochen nach Eingang der Verbindungen ein Ergebnis in einer verschlüsselten Datei per E-Mail.

Der Service umfasst eine 30-minütige Vorinkubation bei Raumtemperatur mit den Testverbindungen und der untersuchten Kinase vor der Messung der Aktivität mit unserer Standardmethode der MSA. Dies ist nützlich, um die Potenz von Verbindungen mit langsamer Bindungskinetik zu bewerten.

Carna bietet einzigartige vorselektierte Panels an. Sie können auch zusätzliche Kinasen für die Kombination eines Panels auswählen.

Für Tests, die bei einem ATP-Km-Wert durchgeführt werden, bilden wir eine Reihe von Gruppen oder "Bins" mit ATP-Konzentrationen in der Nähe des Km-Wertes, aber mit runden Zahlen. Wenn eine Kinase beispielsweise einen ATP-KM-Wert von 47 μM hat, wird sie mit anderen Kinasen mit ähnlichen ATP-KM-Werten gruppiert und bei 50 μM ATP durchgeführt. Auf diese Weise wird sichergestellt, dass jeder Kinase-Assay bei einer ATP-Konzentration durchgeführt wird, die sehr nahe am Km-Wert liegt, und gleichzeitig wird die Effizienz bei der gleichzeitigen Durchführung einer großen Anzahl von Kinase-Assays gewährleistet.

Wir verwenden Staurosporin für die meisten Mobility Shift Assay(MSA)/IMAP™- und ADP-Glo™-Kinase-Assays, oder wir verwenden, falls verfügbar, einen spezifischen Inhibitor für eine bestimmte Kinase. Bitte klicken Sie auf die jeweilige Zielkinase auf der entsprechenden Service-Seite, um zu erfahren, welche Referenz in jedem Assay verwendet wird.
Mobility Shift Assay(MSA)/IMAP™
ADP-Glo™ kinase assays

Ja, wir können Ihnen Musterberichte zur Verfügung stellen. Bitte kontaktieren Sie uns.

Der Assay-Service wird von Carna Biosciences in Japan angeboten und durchgeführt, während Kinase Logistics als Distributor fungiert.

Wir wählen vorrangig den von Promega für jede Kinase spezifizierten Tracer und verwenden ihn nach unserer internen Validierung für unseren Service. Wenn Sie möchten, dass wir einen anderen Tracer verwenden, sprechen Sie uns bitte an.

In der Regel verwenden wir den von Promega empfohlenen Tracer. Gelegentlich wählen wir einen anderen Tracer, wenn unsere internen Testergebnisse darauf hindeuten, dass dieser vorzuziehen ist. Der verwendete Tracer wird im Studienbericht angegeben. Wenn Sie Fragen zu Tracern haben oder an einem Kinase-Assay interessiert sind, der nicht auf der Promega-Website aufgeführt ist, kontaktieren Sie uns bitte.

In der Regel wird die Tracerkonzentration auf 2µmol/L festgelegt, wenn die bei der IC50-Bestimmung verwendete Tracerkonzentration 1µmol/L überschreitet. Andernfalls wird sie auf 1µmol/L festgesetzt.

Ja, bitte fragen Sie nach.

Ja, das kann möglich sein. Bitte kontaktieren Sie uns.

NanoLuc® kann entweder an den N-Terminus oder den C-Terminus der Kinase fusioniert sein. In der Spalte "Vector Name" auf der Promega-Website werden Kinasen, die am N-Terminus an NanoLuc® fusioniert sind, als "NanoLuc®-Kinase Name" bezeichnet, während Kinasen, die am C-Terminus an NanoLuc® fusioniert sind, als "Kinase Name-NanoLuc®" bezeichnet werden. Der Name des Vektors wird im Studienbericht angegeben. Bitte kontaktieren Sie uns, wenn Sie an einer oder mehreren Kinasen interessiert sind, die nicht auf der Promega-Website aufgeführt sind.

Idealerweise sollte die Dissoziation der gebundenen Verbindung von der Kinase bewertet werden, wenn die Verbindung 100 % der Kinase einnimmt und keine ungebundene Verbindung zurückbleibt. Wenn die Konzentration der Verbindung jedoch über IC80-90 hinausgeht, könnte es schwierig werden, die restliche ungebundene Verbindung durch Waschen vollständig zu entfernen, was die genaue Messung beeinträchtigen könnte. Daher wird empfohlen, die Tests bei einer Konzentration von IC80-90 durchzuführen.

Ja, Beispielberichte sind verfügbar. Bitte nehmen Sie mit uns kontakt auf.

Im Allgemeinen halten wir uns an die Anwendungshinweise auf der oben genannten Website von Promega. In der Regel liegt die Konzentration um den EC50-Wert der Tracer-Dosis-Wirkungs-Kurve. Die Obergrenze liegt bei 2 µmol/L

Das BRET- ratio wird nach der folgenden Gleichung unter Verwendung des Donorsignals (NanoLuc® fusionierte Kinase) und des Akzeptorsignals (Tracer) berechnet.

BRET ratio (mBRET)

= {(Acceptor_sample/Donor_sample) – (Acceptor_no tracer/Donor_no tracer)} ×1000

Acceptor_sample: The acceptor signal of the sample or DMSO control in the presence of tracer.
Donor_sample: The donor signal of the sample or DMSO control in the presence of tracer.
Acceptor_no tracer: The acceptor signal of DMSO control in the absence of tracer.
Donor_no tracer: The donor signal of the DMSO control in the absence of tracer.

IMAPTM-beads können auf Anfrage verkauft werden.

Bitte wählen Sie zunächst eine Assay-Kit-Plattform auf der Assay-Kit-seite aus. Auf jeder Kit-Seite finden Sie ein herunterladbares Beispielprotokoll.

Nur die Komponenten der Mobility Shift Assay Kits sind nach dem ersten Kauf des Kits verfügbar. Für unsere nicht mehr erhältlichen TK-ELISA Assay Kits sind alle Kitkomponenten weiterhin erhältlich.

Unser Assay-Kit wird auf Anfrage gefertigt. Normalerweise dauert die Lieferung 2-3 Wochen.

Für die Verwendung von IMAPTM-, ELISA- und TR-FRET-Kits müssen einige Materialien von Ihnen vorbereitet werden. Bitte wählen Sie zunächst eine Assay-Kit-Plattform auf der Assay-Kit-Hauptseite aus und prüfen Sie, welche zusätzlichen Materialien im jeweiligen Beispielprotokoll auf der entsprechenden Assay-Kit-Seite erforderlich sind.

Den Namen des Herstellers und die Katalognummer der von Carna empfohlenen Plate entnehmen Sie bitte dem jeweiligen Protokoll.

Bitte wählen Sie zunächst eine Assay-Kit-Plattform auf der Assay-Kit-seite aus, um zu erfahren, welche Komponenten in den einzelnen Kits enthalten sind.

100dp für ELISA und 400dp für andere Plattformen.

Ja. Diese Assays wurden nicht nur für GPCR-Studien verwendet, sondern auch für Protein-Protein-Wechselwirkungen innerhalb einer Zelle, wie z. B. die FKBP-FRB-Bindung, um Signale zu erkennen. Ob unsere gespaltene Luciferase bei der Messung von Protein-Protein-Wechselwirkungen ein nachweisbares Signal erzeugt, hängt von verschiedenen Faktoren ab: strukturelle Stabilität des Proteins, Expressionsniveau in einer Zelle, Nähe der beiden Luciferase-Fragmente während der Wechselwirkung usw. Wenn Sie einen PPI-Assay unter Verwendung unserer Luciferase-Technologie entwickeln möchten, nehmen Sie bitte Kontakt mit uns auf.

Wir empfehlen die Verwendung des Split Glow Cell Assay Reagenz (PXR-SG001) von Carna, das exklusiv für unseren Split Luciferase Assay entwickelt wurde. Seine Zusammensetzung ist für diesen Assay optimiert, um das hellste Lumineszenzsignal zu erzeugen. Wenn Sie ein Signal innerhalb einer lebenden Zelle (im Gegensatz zu einem Zelllysat) nachweisen möchten, verwenden Sie D-Luciferin (ca. 1,0 mM), das in PBS oder HBSS gelöst ist.

Verwenden Sie ein beliebiges Plattenlesegerät, das für die Biolumineszenz-Detektion geeignet ist, oder ein Luminometer. Ein Detektor mit höherer Empfindlichkeit ist besser.

Die Emerald-Luciferase in unserem Split-Luciferase-Assay weist eine höhere Stabilität innerhalb einer Zelle auf und kann ein fünfzehnmal helleres Signal aussenden als die firefly-Luciferase. Mit unserem Split-Glow-Cell-Assay-Reagenz (PXR-SG001), das die Hintergrundemission reduzieren kann, können Sie stimulierungsabhängige PPI-Signale mit hoher Empfindlichkeit nachweisen. Die Fähigkeit, ein Signal in Zellen für das GPCR-Screening in nur zehn Minuten nach Ligandenstimulation zu detektieren, zeigt auch, dass die Luciferase von Carna für das Hochdurchsatz-Screening von Substanzen sehr nützlich ist. Ihre Anwendbarkeit für die Bildgebung in lebenden Zellen und Tieren macht sie darüber hinaus zu einem wertvollen Instrument für die Bewertung von Verbindungen in lebenden Zellen oder Tieren.

Ja. Die Emerald-Luciferase, die in unserem Split-Luciferase-System verwendet wird, emittiert ein sehr starkes Signal, das es Ihnen ermöglicht, Echtzeitsignale auf Einzelzellebene über mehrere Stunden hinweg abzubilden. Bitte sehen Sie sich das Video über GPCR-Arrestin-Imaging-Daten auf unserer Website an. Verwenden Sie verdünntes D-Luciferin in Medium (ca. 1,0 mM) für das Substrat in einer lebenden Zelle. Bitte kontaktieren Sie uns für detaillierte Assay-Bedingungen.